هدف هذا العمل هو تطوير طريقة بسيطة وعالية الدقة باستخدام الفصل الكهربي الشعري (CZE) لتحليل الأنماط السكرية وتقييم جودة الإنترلوكين-7 البشري المؤتلف (rhIL-7) المنتج في خلايا مبيض الهامستر الصيني. تم اختبار محاليل تنظيم كلاسيكية ومتكافئة كهربائياً، بالإضافة إلى عدة أمينات أحادية استخدمت كمكون قلوي في محلول الإلكتروليت الخلفي (BGE) بتركيز منخفض جداً، وذلك بهدف تحسين الفصل. تم تحقيق أفضل فصل باستخدام شعيرة من السيليكا المنصهرة ومحلول من 25 ملي مول من سترات/تري إيثانول أمين عند pH 2.6. في هذه الظروف الحمضية، تمكن تري إيثانول أمين من عكس التدفق الكهربي الانسيابي (EOF) بشكل ملائم والحد من امتصاص rhIL-7.
أتاحت هذه الطريقة فصل أربع مجموعات من القمم تمثل أنماطاً سكرية تتراوح من منخفضة إلى عالية التشبع بحمض السياليك. كما أُجريت دراسة موسعة حول إجراءات الشطف بين الجولات، وتم اعتماد الشطف باستخدام 50 ملي مول من SDS لتحقيق أفضل تكرارية. وقد تم الحصول على دقة متوسطة ممتازة في زمن الهجرة (RSD < 0.6%)، بينما كانت قيم RSD في الدراسات اليومية أقل من 2.9%. كما لوحظت تكرارية مرضية بين الأيام وداخل اليوم نفسه بالنسبة للمساحة النسبية للقمم.
وأخيراً، أثبتنا أن هذه الطريقة توفر معلومات موثوقة يمكن استخدامها في دراسات المقارنة وإثبات التوافق بين دفعات الإنتاج المختلفة للـ rhIL-7 المصنع حيوياً.
Electrophoresis.
2009.
CZE for Glycoform Profiling and Quality Assessment of Recombinant Human Interleukin-7